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叶绿素含量的测定

叶绿素是高等植物和所有其他能进行植物光合作用的植物中的一种翠绿色黑色素。叶绿素a和叶绿素b均可溶于酒精、医用乙醚、甲苯等有机溶剂,但不溶于水。因此,叶绿素可以用甲苯、乙醇、酒精、乙酸丁酯等极性溶剂提取。那么,光合强度的测量方法是什么呢?

叶绿素是绿色植物进行植物光合作用的关键黑色素,是一大类含脂黑色素,位于类囊体膜上。叶绿素消化吸收大部分红光和紫光,但反射绿光,因此叶绿素呈现翠绿色,在植物光合作用的光吸收中起主导作用。叶绿素是一种镁卟啉化合物,包括叶绿素a、b、c、d、f及其原叶绿素和病原体叶绿素。叶绿素不是很稳定,光、酸、碱、氧、还原剂等都会使其溶解。在酸碱度的标准下,叶绿素的分子结构很容易失去卟啉环中的镁而成为脱镁叶绿素。叶绿素具有造血功能、产生维生素、解毒、抗病等多种主要功能。

光合强度测量

测定光合强度的关键方法有紫外光度法、荧光分析法、活叶绿素法、光声光谱法和高效液相色谱法。但现阶段,比较常用的是光度法。

叶绿素提取物的光谱图表明有两个强消化吸收峰,分别在红光区和蓝紫色区。叶绿素 a 和叶绿素 b 在红色区域的较大消化吸收峰分别在 663 nm 和 645 nm 附近,而在蓝紫色区域,它们分别在 429 nm 和 453 nm 附近。由于得到的有机溶剂和原料不同,光谱仪扫描仪对叶绿素提取物进行扫描后,个体得到的最大吸收值可能会有小幅波动。

高效液相色谱(HPLC)光合强度定量分析准确度高,实际效果很好。流动相采用乙醇和甲苯,体积比为80:20。另外在流动性中加入摩尔质量为0.1%的冰醋酸,水流量为1.0ML/min。使用各黑色素的色谱分析峰总面积进行定量分析,根据外标法从工作曲线中得到叶绿素a和叶绿素b的定量分析。



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